黄曲霉毒素M1检测试剂盒

黄曲霉毒素M1检测试剂盒
概况
黄曲霉毒素(Aflatoxin, AF）是由多种霉菌代谢的毒性产物，例如Asperillus flavus 和Asperillus parasiticus霉菌。他们具有致癌性，存在与谷物、坚果、棉籽和其他人类商品食物中或动物饲料中。谷物可能被黄曲霉毒素的衍生物：B1、B2、G1和G2其中一种污染或者被多种毒素污染。AFB1是目前检测到的最毒的毒素。其他类型毒素如果污染的浓度很高也存在很大的危险。黄曲霉毒素能够引发人类很多病症包括肝癌、黄曲霉中毒、莱耶综合症和慢性肝炎。动物容易摄取到黄曲霉毒素，原因是动物吃的饲料在生长、收割和贮存过程中能被黄曲霉毒素产生的真菌毒素污染。当奶牛吃了被污染的饲料，AFB1在体内羟基化转化成AFM1，AFM1常在牛乳中被检测到。如果牛初乳中存在AFM1，针对一般的牛奶处理方法例如巴氏杀菌，但AFM1是非常稳定的，它可能一直留存到人类最终消费产品中。世界上大多数国家的政府已经对人类和动物性食品中制定了严格的黄曲霉毒素限量标准。很多国家已经声明降低牛奶和奶制品中的AFM1限量标准。欧盟已经将牛奶和奶制品中AFM1的限量定为0.05ug/L或者50ppt。
使用目的
HELICA AFM1 分析测定试剂盒目的是用来定量检测牛奶、奶粉和乳酪中的AFM1。
分析原理
HELICA AFM1 分析测定是一种固相竞争酶联免疫分析测定方法。聚苯乙烯微孔板中包被抗AFM1的高亲和力抗体。将标准品或者样品加入合适的微孔中，如果存在AFM1，它将和包被的抗体结合。接下来，加入HRP（辣根过氧化物酶）标记的毒素，标记毒素与标准品或者样品与抗体没有结合的部位相结合。孵育一段时间后，倒出孔里的液体，清洗后加入显色底物，在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合物的量成正比例的关系，与标准品或样品中AFM1的量成反比例关系。所以，标准品或样品中的AFM1浓度越高，显色的蓝色将会越浅。加入酸，终止反应，底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里，在OD450nm 读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较，相对应得出结果。
试剂盒组成
1×小袋 抗体包被的微孔板 96孔板（12×8微孔板用鼠源AF单克隆抗体）
6×小瓶 AFM1标准品 3.0mL/瓶，AFM1的浓度分别为0.0, 5.0, 10.0, 25.0,
50.0, 100.0pg/mL(ppt) 溶解在稳定脱脂乳中。
1×小瓶 HRP-AF偶联物 绿色盖子 15mL HRP-AF 添加防腐剂的缓冲溶液，可以直接使用
1×小瓶 底物试剂 蓝色盖子 15mL 稳定的尿素过氧化氢物和TMB，可以直接使用
1×小瓶 终止液 红色盖子 15mL 酸性液体，可以直接使用
1×小袋 洗液 PBST （PBS中加入0.05% 吐温20），溶解在1L蒸馏水中，贮存在冰箱中待用
1×小瓶 M1 脱脂乳 白色盖子 15mL 脱脂乳用来制备乳酪提取物
特异性
单克隆抗体的交叉反应如下所述。B1 100%，M1 79%，B2 76%，G1 55%，M2 33%，G2 6%。很明显，抗体对AFM1不是特异性的，事实上AFM1除了在标准品中存在，它主要存在牛奶里，所以可以用这个方法来检测AFM1。需要注意的是可以用来检测人工污染的牛奶利用高浓度的B1、B2、G1和G1毒素。这种特异性抗体不能用来检测可能发生的灾难。
回收率和再现性
牛奶中添加AFM1 浓度50 ppt，回收率结果如下：
%回收率 标准差系数批内分析
脱脂乳
50ppt 100 4.2%
1%脂均质奶
50ppt 93% 4.4%
全脂均质奶
50ppt 92 2.2%
乳酪中的回收率：100pg的AFM1添加到1gm的细碎的意大利干酪中，可以在室温下接触保持一个小时。提取过程如上所描述，AFM1的回收率为60.5%，8个添加提取样品的标准差系数为5.5%。
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