美国Abraxis腹泻性贝类毒素(DSP)ELISA检测试剂盒 说明书

美国Abraxis腹泻性贝类毒素(DSP)ELISA检测试剂盒

使用说明书（中文说明书仅供参考，应以英文说明书为准）

适用
腹泻性贝类毒素检测试剂盒是利用酶联免疫吸附测定法用于水及水产品中腹泻性贝类毒素的定量测定。

检测原理
测定的基础是抗原抗体反应，微孔板包被有针对腹泻性毒素（DSP）抗体的捕捉抗体，加入标准或样品溶液及腹泻性毒素（DSP）酶标记物，游离腹泻性毒素（DSP）与腹泻性毒素（DSP）酶标记物竞争腹泻性毒素（DSP）抗体，同时腹泻性毒素（DSP）抗体与捕捉抗体连接。没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去。将底物和发色剂加入到孔中并且孵育。结合的酶标记物将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色改变。在450nm测量，吸光强度与样品中的浓度成反比。

特异性
腹泻性贝类毒素检测试剂盒能检测Okadaic acid及其它DSP，它们的结合程度是不同，以下表格中展示的是相关值及交叉反映率（%CR），以下所有浓度均为ppb级。

种 类 % CR 种 类 % CR
Okadaic Acid (DTX) 100% Dinophysistoxins DTX-2 50%
Dinophysistoxins DTX-1 50%

检测限
0.2 ppb

提供试剂及材料
试剂盒在2-8ºC贮存（不要冷冻），于盒上标注日期前用完。
• 真空包装微孔板 （12×8条）
• 标准液， 浓度分别为 0,0.1, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0 和5.0 ng/mL (ppb)
• 1 瓶6mL酶标记物.
• 1 瓶6mL抗体.
• 1瓶25ml样品稀释缓冲液(10倍浓缩)(即用即配，例如：10ml浓缩缓冲液+90ml蒸馏水)
• 1 瓶16 mL 底物.
• 1瓶100ml洗板缓冲液(5倍浓缩) (即用即配，例如：10ml浓缩缓冲液+40ml蒸馏水
• 显色液（TMB），16ml
• 2 瓶 6 mL 停止液.
• 英文操作说明书

注意事项
1． 最好配套使用所提供的试剂，不要同其它公司的产品混用，不要将不同批次的产品混用。
2． 样品稀释或含有杂质很可能对结果的准确性有影响。
3． 不要使用过期的产品。
4． 使用之前将所有试剂回升至室温20-28ºC.
5． 标准液含有腹泻性毒素（DSP），应特别小心，避免接触。
6． 停止液是1N硫酸，避免接触皮肤。

试剂盒未提供的材料
1. 可吸取10-200ul和100-1000ul的移液器及吸头.
2. 可吸取10-300ul八道移液器及吸头。
3. 450nm的酶标仪。
样品制备
肌肉样品:样品应当保存在阴凉避光之处及冷藏保存
1. 除去贝壳，用双蒸水洗净贝肉后均质器均质。
2. 称取1g 均质后的样品加入6ml 80%的甲醇(甲醇80：蒸馏水20)
3. 离心：3500g离心10分钟，收集上清液。
4. 加2ml80%的甲醇(甲醇80：蒸馏水20)到上步骤中的残留贝肉组织中再离心：4℃下，3500g离心10分钟，收集上清液，加入到步骤3收集的上清液中。
5. 重复步骤4待收集的上清液达到10ml时，用0.45um的滤膜过滤。
6. 取10ul滤液，用样品稀释缓冲液稀释到1ml(100倍稀释)
7. 取100ul用试剂盒进行分析，此时的稀释倍数是1000。
注意：如样品中含量低可以将稀释倍数降低，例如25倍。如样品含量很高可以将稀释倍数加大，如1000倍。只需要在第5部稀释过程改变。

免疫测定过程 (注意: 标准及样品最好做平行试验以增加准确度)。
1. 将所有试剂及样品置于室温下。
2. 从铝箔袋中拿出要求数量的微孔条，放入干燥剂并重新封好袋子以免微孔条受潮。
3. 吸取100ul标准、样品到对应微孔中，必须保证每种溶液使用干净的吸头吸取，避免交叉污染。
4. 吸取50ul酶标记物到微孔板的每个孔中。
5. 加入50ul抗体溶液到每个小孔中，封板，振荡30sec,不要溅出。
6. 在20-280C下孵育60分钟。
7. 孵育完后，将微孔中的溶液倒入水槽中，用配好的洗板缓冲液清洗微孔，每孔每次至少加入250ul，微震荡洗涤后倒掉，重复三次，总共四次洗板。
8. 在吸水纸上拍打，尽可能将孔内液体拍干。
9. 每个微孔中加入150ul底物溶液。
10. 在20-280C下孵育30分钟。
11. 每个微孔中加入100ul停止液。
2. 450nm下读板。

结果分析
1. 定量分析需要绘制以标准样的吸光率为X轴,以标准样的浓度的半对数为Y轴的曲线图.依据标准样吸光率的点画成一直线,如此样品的光吸收率可在线上找到,与此相对应的Y轴则为样品的浓度。
2. 或用专业的计算软件也可以分析，计算方法用4-Parameter(preferred)或 Logit/Log。
3. 稀释倍数100。



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